高效液相色谱法测定麝香接骨胶囊中三七皂苷藤编制品兴宁片皮机瞬间胶铜件

高效液相色谱法测定麝香接骨胶囊中三七皂苷R1的含量

【摘要】目的：建立麝香接骨胶囊的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm, 5μm，流动相：乙腈-水（21：79 V/V），流速：1.0ml·min-1，检测波长：203nm，柱温：30℃。结果：三七皂苷R1在0.005～0.25mg·ml-1范围内线性关系良好（r=0.9998）；平均加样回收率为97.6%， RSD=1.0%（n=6）。结论：该方法简便易行，结果准确可靠，可适用于麝香接骨胶囊的质量控制。

【关键词】高效真空包装液相色谱法 麝香接骨胶囊 三七皂苷R1 含量测定

Determination of Forsythin content in Shexiang Jiegu Jiaonang by HPLC

【Abstract】 OBJECTIVE:To set up a method for quality control of Shexiang Jiegu Jiaonang METHOD HPLC method was developed to quantitative determination. COLUMN Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm, 5μe mobilic phase was acetonifrile-water (21:79V/V).The column temperature was 30℃,the wavelength for detection was 203nm,flow rate was 1.0ml·min-1. RESULTS The paeonol average of recovery rate was 97.6%, and RSD was 1.0%(n=6). CONCLUSION The method is simple, accurate and suitable for its assaying.

【Key word】 HPLC; Shexiang Jiegu Jiaonang; Notoginsenoside R1; determination

麝香接骨胶囊为《卫生部药品标准》第五册（中药成方制剂）收载的品种，由赤芍、三七、当归、续断、苏木、麝香等22味中药组成，具有散瘀止痛，续筋接骨之功效。临床用于跌打损伤，筋伤骨折，瘀血凝结，闪腰岔气[1]。处方中三七为主药之一，三七皂苷R1为其主要有效成分，原标准中无含量测定方法。为了更好地控制制剂同时也可用于材料或结构件、汽车零部件等的静态力学性能实验的内在质量，本文采用高效液相色谱法测定麝香接骨胶囊中三七皂苷R1的含量，以期为该制剂的质量提供快速、准确的测定方法，现报告如下。

1 仪器与试药

LC－2010A 高效液相色谱仪，CLASS－VP 色谱工作站，紫外检测器；三七皂苷R1对照品（批号：），由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；麝香接骨胶囊为市售样品（辽源市亚东中药有限公司，规格0.3g·粒-1，批号：060801，061102，060912）。乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4最大程度减少企业因国外技术性贸易措施酿成的经济损失.6×250mm, 5μm；流动相：乙腈-水（21：79， V/V）；检测波长：203nm；流速：1.0ml·min-1；柱温：30℃。理论板数按三七皂苷R1峰计应不低于4000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成0.25 mg·ml-1的对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液适量，加甲醇制成0.05mg·ml-1的对照品溶液，即得。

中国已逾越北美、日本、西欧 2.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的麝香接骨胶囊内容物，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50 kHz）1小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣加水饱和的正丁醇30ml使溶解，加氨试液振摇提取3次，每次15ml，合并氨试液提取液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，与上述正丁醇液合并，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移置10ml量瓶中，加甲醇稀释置刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，取续滤液，即得[2]。

<摔跤用品p>2.2.3 阴性对照溶液的制备

取除三七皂苷R1以外的处方中其余药材的十分之一量，按法阀体制成胶囊，再按供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。

2.3 专属性试验

分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（三七皂苷R110.971min）的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。

2.4 线性关系考察

精密吸取三七皂苷R1对照品贮备液（浓度：-1）适量，加甲醇配成浓度分别为0.005、0.01、0.05、0.10、0.15、0.25mg·ml-1的溶液6份，摇匀，用0.22μm微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，其浓度（C）为横坐标，得三七皂苷R1的回归方程为：A=392250.2 C +8620.1，r =0.9998（n=6）。结果表明，三七皂苷R1在0.005～0.25mg·ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取三七皂苷R1对照品溶液（0.05mg·ml-1）10μl，在上述色谱条件下重复进样6次，求得三七皂苷R1溶液峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.3%（n=6），表明精密度较好。

2.6 稳定性试验

精密吸取三七皂苷R1对照品溶液（0.05mg·ml-1）10μl，在0、4、8、12、24、48h分别进行测定，结果表明三七皂苷R1对照品溶液在48h内稳定， RSD为0.4%（n=6）。

2.7 重复性试验

取供试品（批号061101），共6份，分别按“2.2.2供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，进行测定，求得三七皂苷R1含量的RSD为标刻机1.6%（n=6），表明重现性较好。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品（批号061101，三七皂苷R1含量0.93mg·g-1，平均装量0.2996g·粒-1）适量，共6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入三七皂苷R1对照品贮备液（0.25mg·ml-1）各3ml，按“2.2.2供试品溶液的制备”方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。表1 三七皂苷R1加样回收率试验（略）

2.9 样品含量测定

分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定三批样品中三七皂苷R1峰面积，按外标法计算其含量（n=5），结果见表2。表2 3批样品含量测定结果（略）

3 讨论

3.1 通过对3批样品中三七皂苷R1的测定，结果表明最高含量为0.31mg·粒－1，最低为0.27mg·粒－1，综合考虑确定限量每粒含三七皂苷R1不得低于0.20mg。

3.2 流动相的选择 试验中采用不同的流动相甲醇-水（25︰75），乙腈-水-冰醋酸（25︰75︰0.5），结果表明采用流动相乙腈-水（21︰79）的色谱图基线较稳。

3.3 本方法结果准确，方法简便，重现性及回收率均理想，可以作为该制剂的质量控制方法。

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